何,發(fā)色團或熒光團在單位時間內(nèi)產(chǎn)生的激發(fā)-發(fā)射循環(huán)次數(shù)都不能超過一定數(shù)量。因此,信號不能通過增加功率來增強,因為它實際上已經(jīng)飽和。克服這第②個限制的一個邏輯方法是并行化激勵過程,并使用一種可以同時從樣本的多個點激勵和獲取信號的方案。傳統(tǒng)的寬視場照明正是這樣做的。然而對于非線性光學方法,如雙光子熒光顯微鏡,寬視場照明不是一個實用的選擇,因為現(xiàn)有的超快脈沖激光源不能提供足夠的功率來同時激發(fā)整個視場。雖然超快激光不能照亮整個領域,但它們的能量足以同時照亮許多感興趣的點。困難在于有效地將光線重新分配到只需要關注的區(qū)域。純相位型SLM非常適合這項任務,它們可以動態(tài)地調(diào)整可用于成像和光刺激的活動波束的數(shù)量 ...
M有利于探測熒光團的分子環(huán)境,以了解光強測量無法闡明的熒光團行為。圖1中概述了時域和頻域的FLIM測量,并在下面進行詳細描述。簡單地說,時域熒光壽命測量使用短脈沖光進行激發(fā)(相對于樣品的壽命較短),然后直接(即通過門控檢測或脈沖采樣)或使用時間分辨電子技術記錄熒光分子的指數(shù)衰減如圖1(a)及1(b)。另外,頻域技術也可以測量熒光壽命如圖1(c)和1(d)。這里,激勵是連續(xù)的,隨著時間的推移,振幅調(diào)制為正弦波。熒光信號的相位和振幅隨激發(fā)波的變化而變化。通過繪制在一定調(diào)制頻率范圍內(nèi)的相位變化,可以看到熒光團的相位延遲和振幅調(diào)制如圖1(d)。得到的熒光正弦信號可以在頻域解調(diào),以量化熒光強度指數(shù)衰減引 ...
熒光是分子(熒光團)通過發(fā)射可檢測的光子(時間尺度為)衰減到基態(tài)的輻射過程。熒光發(fā)射發(fā)生在激發(fā)電子能級最低的位置(S1)。這種來自最低激發(fā)電子能級的強制發(fā)射確保了發(fā)射光譜保持不變,并且與激發(fā)波長無關。由于振動弛豫和內(nèi)部轉(zhuǎn)換中的能量損失,發(fā)射的熒光光子的能量較低(即發(fā)射發(fā)生在比激發(fā)更長的波長)。這種發(fā)射波長的位移稱為斯托克斯位移。另一個主要發(fā)光過程,磷光,通過被稱為系統(tǒng)間交叉(ISC)的過程發(fā)生在激發(fā)時電子能量躍遷到三元態(tài)能級(T1;T2;:::;Tn)。三重態(tài)的電子具有平行自旋,這些電子躍遷是“自旋禁止的”,通過發(fā)射一個磷光光子或ISC反轉(zhuǎn)和發(fā)射一個延遲的熒光光子,導致向地能級的緩慢躍遷。磷光 ...
能夠充分激發(fā)熒光團。在比較單束和五束成像模式的實驗中,我們將DOE保留在原位,并在兩種實驗中生成5個小波束,它的區(qū)別是在單束實驗中,我們簡單地在中間成像平面放置一個簡單的虹膜隔膜,作為四個小波束路徑上的屏障,只允許一個通過)。在這些條件下,在800 nm處,單個中心光束對樣品的功率為24 mW,而所有五束光的功率之和對樣品的功率為108 mW,其他四束的平均功率為21 mW,每個都在平均值的5%以內(nèi)。檢鏡掃描與單光束雙光子光柵掃描成像相同,并使用放大光電倍增管(PMT)進行檢測(PMT: H7422-P40 Hamamatsu, Bridgewater, NJ, USA;放大器:信號恢復AME ...
記目的開發(fā)的熒光團顯示高達倍的振動響應的出色增強。結果是這種熒光探針可以通過CRS工藝在亞微米濃度下檢測到。這是重要的,因為它開辟了在多標簽樣品中映射不同探針的可能性,不同探針的數(shù)量受限于拉曼線的帶寬,而不是熒光的帶寬。由于檢測通道之間的串擾,在熒光顯微鏡中使用四個以上探針標記樣品具有挑戰(zhàn)性,而在共振增強SRS成像中,多探針標記可以擴展到數(shù)十個不同的探針。就多重成像而言,這種能力是一個巨大的勝利,因為許多細胞生物學研究需要多個分子參與者的可視化來揭示細胞內(nèi)的過程和途徑。通過共振增強SRS提供的多路復用能力可以進一步推動到更低的探針濃度。通過讓探針選擇性僅由SRS激發(fā)過程決定,原則上可以放寬檢測 ...
alk是由于熒光團(如FITC和Cy3)的激發(fā)和發(fā)射光譜的波長范圍有所交集。即使Cy3熒光團是較合適被綠色(~550 nm)光激發(fā),它同樣也能被青色(475 nm)光激發(fā)到足夠的程度,在圖2中很容易被檢測到。通過將四帶通多邊分束器和發(fā)射濾光片改為單帶通二向色鏡和發(fā)射濾光片來消除crosstalk信號,從而在檢測系統(tǒng)的發(fā)射側(cè)實現(xiàn)了更精確的阻擋。這種解決方案是一種妥協(xié),因為它以速度為代價提高了分辨率。當然在熒光成像時,我們需要盡可能的去減小bleedthrough以及crosstalk的影響選擇熒光染料時,應盡量選擇發(fā)射光譜帶寬較窄的同時使用多種熒光染料時,應盡量選擇光譜間沒有重疊的,以免產(chǎn)生信號 ...
等光譜相似的熒光團起到激發(fā)作用。同樣也有針對細胞遺傳學檢測實驗中熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)對475-600nm區(qū)域進行輸出的SOLA FISH型號。以及提供zui廣泛光譜覆蓋范圍,用于激發(fā)熒光團(Cy7和ICG)近紅外輸出的LED白光光源SOLA V-nIR 和 U-nIR。滿足您各種所需波長的需求。Lumencor的LED白光光源擁有精確控制的快速調(diào)節(jié),可以對光源的輸出功率進行調(diào)節(jié)。LED光源所產(chǎn)生的熱輻射較低,不會對于微流控反應器產(chǎn)生過多的熱量影響,從而保證反應的精度和穩(wěn)定性。SOLA系列的LED白光光源耗電量較低,即開即 ...
,特別設計的熒光團優(yōu)先在腫瘤中積聚。當用適當波長的光激發(fā)時,這些材料發(fā)出熒光,以對比的偽色實時顯示腫瘤和其他結構。這支持更完整的腫瘤切除和更好的患者預后。大多數(shù)FGS熒光團被650-810 nm光譜范圍內(nèi)的單色光激發(fā)。那些具有近紅外照明的熒光特別有效,因為更大的穿透深度可以顯示地下生長。此外,一些臨床批準的染料被紫色(405 nm)和青色(490 nm)輸出激發(fā)。由于短波長的穿透深度有限,這些材料通常應用于表面病變。傳統(tǒng)上,熒光成像系統(tǒng)包含激光,這可能是昂貴的,復雜的,而且往往喜怒無常。光纖耦合LED在這種應用中的優(yōu)勢首先是堅固性——當生命受到威脅時,系統(tǒng)不會失敗。LED足夠堅固,可以承受在醫(yī) ...
——提供多個熒光團的激發(fā)以定位多個細胞目標。2.穩(wěn)定輸出——確保數(shù)千個樣本的數(shù)據(jù)質(zhì)量始終如一。3.電子控制——大規(guī)模多路復用分析自動化所需。常用產(chǎn)品型號CELESTA、SOLA、AURA、SPECTRA基因表達分析 Gene Expression Analysis基因表達分析技術是基于高度多路復用測量。其分析性能對于精確度和靈敏度有極高的要求。在目前一種被廣泛采用的策略中,分子“條形碼”和單分子成像被用來檢測和計數(shù)單個反應中數(shù)百種獨特的轉(zhuǎn)錄本。經(jīng)過近十年的實踐經(jīng)驗和完善,這項技術今天已成為了一個被廣泛采用和驗證的平臺,基于高于制定的試劑設計、自動化樣品處理和精密儀器。Lumencor設計、開發(fā) ...
成像。考慮到熒光團的有限頻率響應,選擇LO光束的頻移將拍頻激發(fā)頻譜外差到基帶,以zui大限度利用調(diào)制帶寬。這是必要的,因為AOD通常在升頻的次倍頻通帶上工作,以避免諧波干擾。用于驅(qū)動AOD的射頻頻率梳的直接數(shù)字合成(DDS)定義了每個像素的激發(fā),而這是通過特定的射頻和相位決定的,從而導致射頻頻率梳與檢測信號之間的相位相干性。而這種相位相干性可以使用相敏數(shù)字鎖相放大器的并行陣列使得圖像多路分解,這可以在Matlab中實現(xiàn)。FIRE的并行讀出將導致zui大像素速率等于AODF的帶寬。圖2顯示了FIRE顯微鏡的典型輸出。檢測到的時域信號(圖2a)是來自一排像素的射頻標記發(fā)射的傅里葉疊加。使用短時傅里 ...
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