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白DsRed吸收截面光譜但是，巨幅提高每個時間和面積上可用光子數(shù)量對圖像的真正影響是什么呢？一、更高的激發(fā)效率，更高的圖像亮度理論上，在雙光子顯微鏡中，圖像的亮度與激發(fā)效率直接相關，而激發(fā)效率完全依賴于光子通量和熒光團的二階非線性激發(fā)截面(GM) 。作為一個例子，我們可以嘗試計算熒光蛋白mRFP在15fs激光脈寬（如SCH飛秒激光器）和1050nm中波長照射下的激發(fā)效率。與100fs的激光器相比，15fs激光器具有更寬的帶寬（達200nm），可以在900到1200nm之間激發(fā)mRFP，與100fs激光器的11nm相比，這是一個更寬的光譜區(qū)域。圖3：藍色曲線：以1050nm為中心的SCH 15f ...
微小的雙光子吸收截面將熒光產(chǎn)生限制在顯微鏡物鏡的聚焦體積內(nèi)。為了對樣品中的單個光學截面進行成像，2PFM在二維掃描激發(fā)焦點并記錄每個位置的熒光信號，衍射極限焦點提供z亮的熒光信號以及z高的空間分辨率。然而，只有通過自適應光學(adaptive optics, AO)才能維持在體深度的高空間分辨率，自適應光學可以測量和校正成像光穿過光異質(zhì)樣品時在波前積累的光學像差。AO與2PFM相結合，將校正的相位模式應用于物鏡后瞳平面(back pupil plane)的激發(fā)波前，可以實現(xiàn)衍射極限性能，并且可以在大腦表面以下數(shù)百微米處解析突觸。大腦的在體成像也需要高時間分辨率，對于大腦內(nèi)的功能成像，需要亞秒級 ...
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